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Fmoc-l- 苯丙氨酸的性质及制备

Fmoc-L-苯丙氨酸的基本性质

Fmoc-L-苯丙氨酸外观呈白色结晶粉末,其密度是1.3±0.1 g/cm3,沸点是620.1±50.0 °C at 760 mmHg,熔点是80-187  C(lit.)。其分子式C24H21NO4,分子量387.428,闪电为328.8±30.1 °C,PSA为75.63000,LogP是5.41,蒸汽压为0.0±1.9 mmHg at 25°C,折射率为1.633[1]。

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图1 Fmoc-1-苯丙氨酸的结构式。

Fmoc-L-苯丙氨酸的制备

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图2 Fmoc-L-苯丙氨酸的合成一个步骤[2]。

在0°C HCTU (0.64 g, 0.0015, 1.2等)、胺反应物(0.51 g, 0.0013 mol, 1等)和DIEA (0.66 mL, 0.0039 mol, 3等)的二氯甲烷 (15 mL)溶液中加入fmoc - l- valoh (0.44 g, 0.0013 mol, 1等)。随后将所得混合物加温至室温,并搅拌12小时。用DCM (30 mL)稀释不良反应进行混合物,用NaHCO3水(2 × 20 mL)洗涤。有机层在无水 Na2SO4中干燥,真空浓缩。快速柱色谱纯化。 在室温下将二肽反应物(500mg,0.8mmol,1当量)加入到钯/碳(100mg,10mol%)在甲醇(22mL)中的溶液中。将反应物在氢气(气球)气氛中搅拌1小时,过滤硅藻土。硅藻土用甲醇洗涤数次,合并滤液真空浓缩。将Fmoc-AA1-OH或AA2-AA1-OH二肽(1.2等份)和HCTU(1.2等份)在CH2Cl2 (1.5毫升)和DMF (0.5毫升)中的溶液加入到含有游离胺的聚合物中,加入DIEA(3等份),搅拌并反应3小时。将反应进行混合物可以浓缩至1 mL,加入大量乙醚(10 mL)。离心悬浮液并倾析上清液以提供含有负载的三肽的沉淀。将沉淀物溶于 dmf (0.5 ml)中,用乙醚(10 ml × 3)沉淀。肽经真空干燥沉淀,重复脱保护/偶联步骤(单一氨基酸)得到与载体结合的游离胺。采用 Lioh · h2o (4当量)分离多肽,分离时间为1h。上清液中的肽以盐的形式存在,而载体反应物以沉淀的形式回收。水溶液用稀释的盐酸锂盐冻干以酸化多肽。将N, N-二异丙基碳二亚胺(31.2 μL, 0.2 mmol, 3等量)和DMAP (2.4 mg, 0.02 mmol, 0.3等量)加入DMF (0.5 mL)的载体溶液(50 mg, 0.067 mmol, 1等量)和Fmoc-AAOH(1.2等量)中。在室温下搅拌进行反应6小时。用乙醚沉淀,然后离心得到目标产物Fmoc-L-苯丙氨酸。

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图3 Fmoc-L-苯丙氨酸的合成步骤[3]。

将Boc酸酐(3.37 mL,0.015 mol,1.5当量)添加到0°C下1:1水/二氧六环(20 mL)中的L-Trp-OH(2 g,0.009 mol,1当量)和碳酸氢钠(1.64 g,0.019 mol,2当量)的搅拌溶液中。将反应进行加热至室温并允许通过搅拌13小时,随后在真空中可以浓缩以及二氧六环。残余的水溶液用乙酸乙酯(2×30 mL)洗涤,用稀HCl (5%)酸化,用乙酸乙酯(2×30 mL)萃取。合并的有机物层经无水na2so4干燥,过滤,并且在真空中浓缩。Boc LTrp-OH 7b,2.7 g(93%),白色固体。TLC Rf=0.2(50%乙酸乙酯/己烷)。在室温下,将苄基溴(0.87 mL,0.0074 mol,1.5当量)添加到Boc色氨酸7b(1.5 g,0.005 mol,1当量)和碳酸钾(1.35 g,0.01 mol,2当量)在MeCN(25 mL)中的溶液中。将反应物搅拌12小时。随后,用乙酸乙酯(35 mL)稀释不良反应进行混合物并用水(2×40 mL)洗涤。合并的有机物层经无水na2so4干燥,过滤,并且在真空中浓缩。通过企业快速柱色谱法(10%乙酸乙酯/己烷)纯化。化合物8b在1.7g(88%)中呈白色作为固体。TLC Rf=0.5(20%乙酸乙酯/己烷)。将HCTU(0.64 g,0.0015,1.2当量)、胺9b(0.51 g,0.0013 mol,1当量)和DIEA(0.66 mL,0.0039 mol,3当量)添加到0°C下的Fmoc-L-Val-OH(0.44 g,0.0013 mol,1当量)DCM(15 mL)溶液中。随后将所得混合物加温至室温,并搅拌12小时。用DCM(30 mL)稀释不良反应进行混合物,并用NaHCO3水溶液(2×20 mL)洗涤。用无水Na2SO4干燥合并的有机层,并真空浓缩。快速柱色谱纯化。0.62克(77%%)肽10b是白色固体。TLC Rf=0.1(DCM)。在室温下,将钯碳(100毫克,10摩尔%%)加入二肽10b(500毫克,0.8毫摩尔,1当量)的甲醇(22毫升)溶液中。将反应物在氢气气氛(气球)中搅拌1小时,然后在硅藻土上过滤。用甲醇进行多次通过洗涤硅藻土,并在真空中浓缩企业合并滤液。402毫克(96%)二肽11b,白色固体。TLC Rf=0.2(5%甲醇/DCM)。

将Fmoc-AA1-OH或AA2-AA1-OH二肽(1.2当量)和hctu(1.2当量)在CH2Cl2(1.5mL)和DMF(0.5mL)中的溶液加入到含游离胺的聚合物中,并将DIEA(3当量)加入混合物中,并使反应搅拌3小时。将反应混合物浓缩至1mL,并向其中加入醚(10mL)。将悬浮液进行离心,倾析上清液以提供一个含有三肽的载体可以作为沉淀物。将沉淀溶于DMF(0.5mL)中并用乙醚(10mL × 3)再沉淀。将沉淀在真空中干燥,并如上所述重复脱保护/偶联步骤(使用单一氨基酸)以获得具有附着于载体的游离胺的肽。最后,在四氢呋喃中用LiOH H2O (4当量)将肽从载体上裂解1小时。上清液中含有盐形态的多肽,而载体2a 作为沉淀物回收。肽的锂盐用稀盐酸酸化,水溶液冻干。粗肽,通过半结构制备RP-HPLC纯化,最后可以得到发展目标进行化合物Fmoc-L-苯丙氨酸。


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